Au théâtre, Stéphane E. Roy écrit et joue dans plusieurs pièces, entres autres, les succès Mars et Vénus (coécrite avec Sylvain Larocque), Neuf variations sur le vide (Transposé au Cinéma dans 9 Le Film) Me, Myself et moi-même, Ils se sont aimés et La capitulation. Stéphane a étudié à l'Université du Québec à Montréal (UQAM) en art dramatique. Il a fait partie du groupe d'humour Les Bizarroïdes de 1990 à 2000, groupe sacré révélation du festival Juste pour rire en 1994. À la télévision, on a pu le voir comme acteur entre autres dans des séries télévisées telles que Caméra Café, Cauchemar d'amour, Avec des Guns, Le Plateau, Ooops et Les Bougon ; et comme chroniqueur d’émissions de services à Télé-Québec telles Les Quatre Cents Coûts et Deux filles le matin ainsi que Sucré salé au réseau TVA. En 1991, il fonde la Ligue d'improvisation montréalaise, ligue d'improvisation expérimentale. En 2001, il crée Les Cabarets littéraires - Les Auteurs du dimanche, qu'il anime pendant six ans, des soirées où les auteurs écrivent et lisent un texte sur un thème imposé. En 2008, il met en scène des émissions humoristiques du duo Ben et Jarrod, diffusées à Super Écran et coécrit et joue dans le film Le Cas Roberge. En 2009, il réalise pour Canal D huit émissions humoristiques d'une heure avec le duo Ben et Jarrod. En 2010, il reçoit deux nominations dans la catégorie « meilleure série humoristique » au gala de l'Association québécoise de l'industrie du disque, du spectacle et de la vidéo (ADISQ) ; et au Gala Les Olivier, pour son travail de réalisateur du Temps d'une molle. En 2012-2013, il tient le rôle de Martin dans la comédie romantique Ils se sont aimés et en 2016, il joue, réalise et co-écrit 9 LeFilm, l'adaptation cinématographique de sa pièce de théâtre Neuf variations sur le vide, avec neuf autres réalisateurs : Ricardo Trogi, Érik Canuel, Micheline Lanctôt, Marc Labrèche, Luc Picard, Éric Tessier, Jean-Philippe Duval et Claude Brie. Le film remporte le prix du Public à Cannes, au 9e festival du Cinéma Québécois de Cannes.